【摘要】 目的 观察PTEN在食管鳞癌组织当中的表达,探讨其与食管鳞癌发生的联系及其临床意义。方法 应用免疫组化S - P 法检测食管鳞癌组织、癌旁正常食管组织中PTEN的蛋白表达情况。结果 PTEN 在正常食管黏膜和食管癌中阳性率分别为96.4% , 65.5%。PTEN表达与食管癌的分化程度高低、浸润深度、是否有淋巴结转移和临床分期关系密切( P<0. 05) ,与患者年龄、性别无关( P>0. 05) 。结论 PTEN 蛋白异常表达在食管鳞癌发生发展过程中有重要作用。
【关键词】 食管鳞癌; PTEN;蛋白表达
Expression of PTEN in esophageal squamous cell carcinoma ( ESCC) and itsclinical significance
HUANG Qi-guo,NI Yang-peng,CHEN Man,et al.
Dept of path, People’s hospital of Jieyang city Guangdong, Jieyang 522000,China
【Abstract】 Objective To investigate the protein expression and its significance of tumor suppressor gene PTENin esophageal squamous cell carcinoma ( ESCC) . Methods Immunohistochemical staining S - P method was used to determine the expression of PTENin ESCC and the normal esophageal tissues ( NET) which were adjacent to the carcinoma. Results The positive rate ofexpression of PTEN p rotein in NET and ESCC were 96.4% and 65.5%. Expression of PTEN in ESCC was related with expression of lymph node matastais , differention , TNM stage , tumor invasion ( P<0. 05) , and no relationship with the patients’age andgender( P>0. 05). Conclusion It is suggested that PTEN can be an objective marker for its pathological and biological behaviors of esophageal squamous cell carcinoma.
【Key words】 Esophageal squamous cell carcinoma; PTEN; Protein expression
作者单位:522000 揭阳市人民医院病理科
PTEN ( Phosphates and Tension homolog deleted on chromosome Ten) /MMAC1 (Mutated in Multip le Advanced Cancer 1 ) /TEP1 ( TGFβ regulated and ep ithelial cell eiched phosphates 1)基因现简称为PTEN, 是Li等[1]1997年从原发性乳腺癌、前列腺癌以及胶质母细胞瘤细胞株克隆得到的位于染色10q23.3的一种具有双特异性磷酸酶活性的新型抑癌因。PTEN与p53相似,可能具有维护基因组稳定的监护人的功能[2]。该基因自发现以来就受到很多研究者的关注,其结构、功能异常广泛存在于人类多种恶性肿瘤中,已成为近年肿瘤学研究的热点。
食管鳞癌为我国消化道常见肿瘤,以河南林县最多,广东揭阳地区也为全国高发区之一。食管鳞癌恶性度高,5年生存率仅20%上下,但其病因和发病机制尚不明确,可能与原癌基因激活、抑癌基因失活以及细胞凋亡相关基因和肿瘤转移抑制基因异常等有关[3]。因此,加强对本地区食管鳞癌的分子病理学变化的研究,不仅有助于阐明其发生、发展的机制,而且更利于指导临床治疗。本实验应用免疫组化技术S-P法对食管鳞癌组织(ESCC)、癌旁正常食管组织(NET)中PTEN的表达进行检测,以期分析抑癌基因PTEN在食管鳞癌发生发展过程中的作用及其临床病理意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2006年1月至2009年1月在本院诊治的食管癌患者84例,其中男51例,女33例,年龄42～75岁,中位年龄56.5岁。TNM分期:Ⅰ期21例,Ⅱ期30例,Ⅲ期21例,Ⅳ期12例;组织分级:鳞癌I级18例,鳞癌Ⅱ
级18例,鳞癌Ⅲ级48例。癌旁组织取自标本切缘正常组织。曾经接受过手术治疗后复发者及经辅助治疗的患者,不包括在本次研究之内。
1.2 研究方法 组织经10%福尔马林溶液固定,石蜡包埋,采用免疫组织化学S-P法进行免疫组化染色。将石蜡标本连续切片,切片厚4 μm;采用免疫组化方法(二步法),购自上海长岛抗体诊断试剂公司,操作步骤按说明书进行,用已知的阳性切片作为阳性对照,用PBS代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果判定 免疫组化染色阳性反应为细胞浆或胞核中出现淡黄色至棕褐色颗粒。根据染色的强度及阳性细胞所占的面积比判断结果。每张切片阳性细胞的染色强度按无着色、淡黄色、棕黄色和棕褐色分别计分为0、1、2、3分;按阳性细胞面积比分别计分,0%为0分,1%～25%为1分,26%～50%为2分,51%～75%为3分、76%～100%为4分。然后根据两项打分之和判断结果:0分为阴性(-),<3分为阳性(+),3～6分为中度阳性(++),>6分为强阳性(+++)。(注:每张切片选择有代表性的区域,在100倍视野下进行计数,共计5个视野,为避免随意性取其平均值。
1.4 统计学方法 数据采用SPSS 10.0软件包进行分析处理,组间比较采用卡方检验,检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 PTEN在食管鳞癌和正常食管黏膜的表达 食管鳞癌和正常食管黏膜表达PTEN阳性主要定位在食管上皮鳞状细胞及鳞癌细胞的胞浆中,呈淡黄色或棕黄色。在食管癌组织和正常食管黏膜的阳性率分别为59.5%和96.4%,两者相比差异有显著性(P<0.05)。
2.2 PTEN表达与食管癌组织临床病理指标的关系 本实验结果表明,组织分级I级至Ⅱ级的鳞癌组织PTEN表达高于组织分级Ⅲ级鳞癌组织表达,差异有显著性(P<0.05);无淋巴结转移PTEN表达高于有淋巴结转移表达,差异有显著性(P<0.05);浸润深度未超过浆膜层PTEN表达显著高于侵及浆膜层外表达,两者之间差异有统计学意义(P<0.05),临床分期Ⅰ～Ⅱ期的食管癌PTEN表达高于Ⅲ～Ⅳ期食管癌表达。这提示食管癌组织的PTEN表达与组织分级、淋巴结转移、浸润深度、TNM分期密切相关,而与性别和年龄无关(见表1)。
表1
食管癌组织PTEN蛋白的表达与临床病理指标的关系(例)
临床病理指标例数PTEN蛋白
-+ +++++阳性率(%)χ2P值
组织癌旁正常组织84 39 2943 96.4 33.31<0. 05
癌组织 8434151718 59.5
组织分级
Ⅰ～Ⅱ级 3679 101080.6 11.57<0.05
Ⅲ级48276 78 43. 8
浸润深度
未超过浆膜层 37 69 111183.8 16.15<0. 05
侵及浆膜层外 472866740.4
局部淋巴结转移
无39 8 7 11 1379.5 12.04 <0.05
有452686 542.2
TNM分期
Ⅰ～Ⅱ期 51 151013 13 70.66.60 <0.05
Ⅲ～Ⅳ期 33 195 45 42.4
性别
男51218 913 58.8 0.03>0.05
女33137 85 60.6
年龄
<60岁39167 8859.00.01>0.05
≥60岁 4518 8 910 60.0
3 讨论
肿瘤抑制基因PTEN蛋白异常表达常见于多种恶性肿瘤组织中,但基因突变率在不同肿瘤类型中有较大差别[1,4]。肿瘤的发生是经过多步骤演变导致多基因突变累积的结果,近年来研究发现,抑癌基因功能丧失在食管癌的发生发展中具有十分重要的作用。PTEN的抑癌机制与其结构密切相关,目前普遍认为是由以下3条途径共同完成的。①首先,占整个蛋白的一半的氨基端磷酸酶区域是其发挥抑癌作用的主要区域。②其次,PTEN具有的特异性蛋白磷酸酶功能则通过抑制整合素下游分子黏着斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)及FAK下游分子P130Cas的酪氨酸磷酸化,从而抑制FAK介导的细胞浸润转移及其生长。因此认为, FAK和P130Cas磷酸化水平增高促进细胞转移[5]。PTEN则通过以上机制抑制癌细胞迁移、扩散和黏附。③再次,PTEN过表达使细胞因子诱导的细胞分裂素活化蛋白激酶(nitrogen activated protein kinase,MAPK)磷酸化水平明显下降,从而通过抑制MAPK中细胞外信号调节激酶(ERK)、ERK激活酶(MEK)、小G蛋白(Ras)等的活化而抑制MAPK途径,也就抑制了c2ras和v2mos依赖的细胞生长和转化[6]。另有研究表明,PTEN失活有助于肿瘤细胞浸润和转移的发生[7-8]。本实验发现,食管鳞癌组织中PTEN的表达总阳性率为59.5%,显著低于正常食管黏膜组织,表明食管癌组织中存在着PTEN基因的异常表达,PTEN蛋白水平低于正常食管粘膜组织,提示PTEN在食管癌的发生中起着重要的作用。PTEN在组织分级Ⅲ级鳞癌组织中阳性表达率为43.8%,显著低于组织分级I～Ⅱ级鳞癌组织的表达率80.6%(P<0.05),这表明随着肿瘤的分化程度的降低其表达有下调的趋势。TNM分期Ⅲ～Ⅳ期食管癌阳性表达率为42.4%低于Ⅰ～Ⅱ期食管癌表达率70.6%(P<0.05),推测PTEN蛋白下降或缺失使其抑制细胞不正常增殖分裂功能丧失,因而与食管鳞癌的发展有关。本实验结果表明,伴有淋巴结转移的PTEN阳性表达率低于无淋巴结转移的PTEN表达率,两者间差异有统计学意义;随着浸润深度的加深,PTEN的阳性表达率逐渐降低,差异存在统计学意义(P<0.05),我们的实验结果与Lee等的研究结果[9]近似,结合各临床病理参数,可以表明PTEN在食管鳞癌发生发展过程中可能有重要作用,其为食管鳞癌治疗和预后估计寻找一个新的可靠指标,并指导食管癌选择治疗方案,提高食管癌的治疗效果。
参 考 文 献
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